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Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2
浏览量:

Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2

货　　号：
C214-01/02
价　　格：
?
560.00
数　　量：
-
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Mut Express? II Fast Mutagenesis Kit V2

一步法单 / 双点突变试剂盒

Phanta? Max Super-Fidelity DNA Polymerase 高保真酶提供保真度超高的PCR 反应
       扩增以指数方式进行，模板使用量极低，有利于原始甲基化模板的彻底降解
       扩增产物经DpnI 消化后可直接用于重组反应
       可对目标质粒上单个位点或两个不连续位点( 相距超过50 bp) 同时进行定点突变

提供在线引物设计软件CE Design

实验流程:

 

Mut Express? II Fast Mutagenesis Kit V2 是基于ClonExpress? 快速克隆技术的定点突变系统。使用本试剂盒，目标质粒扩增产物经DpnI 消化、ClonExpress? 重组环化后直接进行转化即可完成定点突变。该试剂盒由Phanta? Max Super-Fidelity DNA Polymerase 扩增模块和ClonExpress? 快速克隆模块组成。Phanta? MaxSuper-Fidelity DNA Polymerase 超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性，ClonExpress? 快速克隆系统利用高效同源重组反应替代了传统的退火成环反应。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及极高的成功率，使得Mut Express? II Fast Mutagenesis Kit V2 成为DNA 定点突变首选试剂盒。

组分

C214-01(10 rxn)

C214-02(25 rxn)

2×Max Buffer

1.25 mL

1.25 mL

dNTP Mix(10 mM each)

20μl

50μl

Phanta? Max Super-Fidelity DNA Polymerase

20μl

50μl

DpnI(10 U/μl)

20μl

50μl

5×CE II Buffer

40μl

100μl

Exnase?II

20μl

50μl

- 20℃储存

未找到相应参数组，请于后台属性模板中添加

Q1：质粒模板无法正常扩增。

A1：(1) 引物设计有误：核对引物设计方案；

(2) 扩增体系配制错误：重复实验；

(3) 扩增反应条件不优化：调整Mg2+浓度、酶量、扩增程序；

(4) 模板质粒质量偏差：长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的质粒作为模板。

Q2：平板上长不出克隆或者克隆数很少。

A2：(1) 感受态效率低：使用新制备或妥善冻存的感受态细胞，确保转化效率需＞107 cfu/μg。每次可设置一组转化质粒的对照试验，以检测感受态细胞的转化效率；

(2) 重组反应体系中DNA量不足或比例不佳（双碱基突变）：尽量按照说明书推荐的量配置重组体系。请务必预先检测DpnI消化产物的浓度。常用的吸光度测量法极易受DNA纯度、DNA稀释液pH等因素影响，测定值和DNA实际浓度往往偏差非常大；

(3) 重组环化反应体系中DNA不纯，抑制反应：未纯化DpnI消化产物加入重组体系内的总体积不应超过4ul（反应体系体积1/5）。尝试对DpnI消化产物进行胶回收纯化。重组反应体系中应尽量避免金属络合剂（如EDTA）的带入。因此，我们推荐您将DNA纯化产物溶解在pH8.0的ddH2O中保存（常规胶回收试剂盒中的洗脱液可用8.0的ddH2O替代），请勿使用TE进行DNA保存；

(4) 感受态细胞中加入了过多的反应产物：反应产物的转化体积不应超过感受态细胞体积的1/10，否则会降低转化效率； 

(5) 出现转化抑制效应：当转化的DNA浓度太高时，会抑制转化反应，将重组反应产物稀释5倍后取1/5进行转化。

Q3：定点突变未正确完成。

A3：(1) 引物设计错误：核对引物设计方案；

(2) 扩增反应所用模板为非甲基化的质粒：DpnI只能识别甲基化DNA，请务必使用从甲基化酶无缺陷的宿主菌中扩增的质粒作为PCR模板；

(3) 扩增反应使用过多的模板质粒：对大多数质粒，1ng模板量已足以使扩增反应正常进行，过多的质粒模板将会导致DpnI消化不完全，降低突变成功率。

Q4：非目标位点突变。

A4：(1) 模板质粒携带未知位点突变：测序确认模板质粒序列正确性；

(2) 扩增循环数过多：为了防止扩增过程中引入非目标突变，扩增循环数不宜超过35。如果扩增效率良好的话，推荐扩增循环数应不超过30。

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暂未实现,敬请期待
暂未实现,敬请期待
C214-Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2-V9.1(zq).pdf

Ultra GelRed Nucleic Acid Stain (10000×)
货　　号
GR501-01/02/03

DL2000 Plus DNA Marker
货　　号
MD101-01/02

DL5000 DNA Marker
货　　号
MD102-01/02

DL 15000 DNA Marker
货　　号
MD103-01/02

100 bp DNA Ladder
货　　号
MD104-01/02

2×Taq Plus Master Mix Ⅱ（Dye Plus）
货　　号
P213-01/02/03
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